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      1. MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

        使用說明書

        僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!

        第1版(2016年04月修訂)

        ???[關聯信息]

        ??    細胞增殖及細胞毒理檢測實驗,被廣泛應用于評估一些影響細胞周期的因子,如:生長因子.細胞因子.有絲分裂原以及影響細胞分裂和增殖的藥物等,成為在醫學檢測、藥物檢測以及食品和環境安全檢測中的一個重要手段。??

        ?

        [基本原理]

           ?噻唑蘭(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT),是一種可接受氫離子的化合物染料,帶正電荷,具有很強的細胞膜滲透性。當MTT進入活細胞中后,線粒體中的琥珀酸脫氫酶將MTT還原成深藍色的MTT-甲臜結晶。甲臜結晶不具有細胞膜滲透性,將會被永久的保留在活細胞內,使活細胞著色。而死細胞一方面細胞膜被破壞不具有選擇透過性,另一方面不具有將MTT還原形成MTT-甲臜結晶的能力,將不會被著色。甲臜結晶在570nm波長處具有最高吸收峰,通過酶標儀檢測??OD570nm,??便能很好的反應體系中甲臜的生成量。而甲臜的生成量與活細胞數目成正比,用以評估細胞存活和增值狀況。??

        [產品組分]  ??

        規格??

        ??1000次??

        ???試劑A:MTT(粉末)??

        ??50 mg??

        ??試劑B:MTT溶解液??

        ??12 ml??

        ??試劑C:甲臜溶解液??

        ??120 ml??

        ??說明書??

        ??1份??


        [保存條件和有效期]

        試劑A和試劑B需避光-20℃保存,試劑C放置于4℃保存。未開封試劑,有效期12個月。???

        ?

        [使用方法] 

        A.實驗前試劑準備

        ??1. MTT溶液配置

          ?用5ml MTT溶解液直接溶解25mg MTT粉末配制成5mg/ml的工作液,過濾除菌,該溶液可4℃ 避光短時間保存(越短越好)。建議溶解后,直接將剩余液體小劑量分裝放到-20℃保存,能穩定保存3-6個月,避免反復凍融。??

        ??2. 甲臜溶解液??

           甲臜溶解液低溫或者常溫保存可能會產生沉淀,只需37℃水浴使其充分溶解,混勻后即可使用。?????

        B.MTT細胞增殖檢測

        ??1. 接種細胞:用含10%胎牛血清(FBS)的培養液配制成細胞懸液,調整細胞密度,以每孔??5×103~2×104個細胞接種到96孔板,每孔體積100μl,同時設置調零孔(培養基+MTT+甲臜溶解液),對照孔(細胞+相同濃度的藥物溶解介質+培養液+MTT+ 甲臜溶解液)。

        ??2. 37℃,5% CO2,培養24-72h。??

        ??3. 可選:對于貼壁細胞,去除舊的培養液,更換100μl/孔新鮮的培養液(不含酚紅);對于懸浮細胞,離心96孔板,去除盡可能多的上清液。然后加入100μl/孔新鮮的培養液(不含酚紅)重懸細胞。??

        ??4. 每孔加入10μl MTT工作液(5mg/ml)。??

        ??5. 水平搖床上低速混勻1min后,放入37℃培養箱孵育4h。注:對于高密度的細胞(>100,000 個/孔)可縮短孵育時間至2h。??

        ??6. 對于貼壁細胞,直接吸掉舊的培養液,避免槍尖刮破單細胞層。對于懸浮細胞,離心收集細胞,去除培養液。??

        ??7. 加入100μl/孔甲臜溶解液,用槍充分混勻后放入37℃培養箱孵育4 h。??

        ??8. 孵育結束,放置在酶標儀上搖勻后,選擇570nm,測定吸光度。????

        [注意事項] 

        ??1. MTT溶液對溫度.光照和有菌環境比較敏感,較長時間保存需低溫、遮光并在無菌條件下保存。當溶液顏色變為灰綠色請勿使用。??

        ??2. MTT溶液在低溫下會凝固,請置于室溫或20~25℃,直到溶液全部溶解并混勻后使用。??

        ??3. 如使用96T板長時間進行細胞培養和檢測,為防止液體蒸發給檢測結果帶來的不穩定性,可在培養板的邊緣孔用無菌PBS,水或者培養液填充。??

        ??4. 在細胞培養板孔中加入甲臜溶解液后,在普通光學顯微鏡下注意觀察甲臜的溶解情況,當甲臜正好全部溶解時進行OD570nm的檢測最為準確,長時間的孵育將降低檢測的靈敏度。通常37℃孵育4小時左右,紫色結晶會全部溶解。如果紫色結晶較小較少,溶解的時間會短一些。如果紫色結晶較大較多,溶解的時間會長一些。??

        ??5. MTT溶液具有弱毒性,甲臜溶解液具有腐蝕性,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套按照實驗室標準操作手冊進行實驗。??

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        • MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
        圖片展示
        • Certificate
        通過ISO 9001、ISO 13485質量體系認證
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