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      1. 細胞侵襲實驗服務

        使用說明書

        僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!

        第1版(2016年04月修訂)

        【服務內容】

        侵襲實驗大部分是對腫瘤細胞侵襲能力的檢測,將待研究的細胞加入Transwell小室的上室,下室加入高濃度FBS培養液,下室的培養液影響上室的細胞,使細胞透過基質膠和聚碳酸酯膜,記錄細胞的穿過膜的個數,實驗過程中不同處理組的細胞透過膜的個數不同,其侵襲能力不同,本實驗的目的是檢測細胞的侵襲能力的強弱。

        【項目和周期】

        周期:1~2周

        基本步驟:

        (1)預冷:槍頭、EP 管、培養板、Transwell小室4℃預冷半小時。

        (2)包被基底膜:Matrigel膠4℃過夜融化成液態后與無血清 DMEM培養基按1:9比例稀釋,每孔 40ul 稀釋膠均勻涂布于 Transwell小室濾膜的上表面,37℃、5%CO2細胞培養箱內孵育2小時。

        (3)水化基底膜:每室加入50ul無血清的DMEM 培養基,于37℃、5%CO2細胞培養箱內孵育1小時,吸棄培養液。

        (4)制備單細胞懸液:分別取轉染后培養 24 小時的細胞,0.25%胰酶消化并收集細胞,1000rpm 離心 5min,棄上清液,用無血清 DMEM 培養液重懸細胞,計數,調整細胞密度為 1×10e6 個/ml。

        (5)接種細胞:將單細胞重懸液各取 200ul 加入上室,下室中加入600ul含 30%FBS 的 DMEM 培養液,每組細胞設3個復孔。種板時注意下層培養基和小室中的聚碳酸酯膜間不要有氣泡產生,于37℃、5%CO2 細胞培養箱內培養72小時。

        (6)固定、染色:取出小室,小心吸去上室的培養液,PBS緩沖液輕洗 3次,用消毒濕棉簽輕輕擦凈上室未侵襲細胞及 Martrigel膠,95%酒精固定30min,結晶紫染色 10min,自來水沖洗3次以上,晾干。

        (7)拍照、計數:20 倍光學顯微鏡下觀察,計數每視野的侵襲細胞數,計算平均值。實驗數據重復3次。

         

        【客戶提供的材料】

         1.待檢測或處理的細胞;如果常見的人和大小鼠細胞系,公司可免費提供。

         2.細胞處理的相關藥物和實驗方案;

        【反饋給客戶結果】

         1、提供相應實驗數據和圖表;

         2、提供具體的實驗報告;


        • Cell Invasion Assay Service
        圖片展示
        • Certificate
        通過ISO 9001、ISO 13485質量體系認證
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