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      1. CCK-8試劑盒

        使用說明書

        僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!

        第1版(2016年04月修訂)

        [產品信息]

        WST-8【化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物,生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。CCK-8試劑盒是一款基于WST-8顯色為基本原理,廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測試劑盒。

        [試劑組分]

        組分

        IS087-1(100次裝)

        IS087-2(200次裝)

        IS087-3(500次裝)

        CCK8溶液

        1ml

        2ml

        5ml

        使用說明書

        一份

        [適用范圍]

        藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。

        [儲存及有效期]

        -20℃避光保存,一年有效。

        [實驗操作]

        1. 取生長狀態良好的細胞制備成一定濃度的細胞懸液,每孔100ul加入96孔細胞培養板中。根據實驗需求,在培養孔中加入0-10ul待測的藥物繼續培養。

        2. 將試劑盒中的CCK-8溶液取10ul加入96孔細胞培養板,在37℃培養箱中繼續孵育0.5-4小時。

        3. 在450nm測定吸光度。建議采用雙波長進行測定,檢測波長430-490nm,參比波長600-650nm。

        [注意事項]

        1. 通常細胞增殖實驗每孔加入2000個/100ul 細胞,細胞毒性實驗每孔加入5000/100ul 個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小、細胞增殖速度的快慢等因素決定)。

        2. 如果是貼壁細胞,需要37℃培養箱進行預培養2-4小時等細胞貼壁后再開展實驗,如果是懸浮細胞,不需要預培養。

        3. 如果是做細胞毒性試驗,加入毒性物質后的培養時間需要摸索。要看毒性物質的性質和細胞的敏感性,一般要根據細胞周期來決定,起碼要一代以上的時間。

        4. 如果細胞起始的培養體積為200ul,則需加入20ul的CCK-8溶液,其它情況以此類推。

        5. 建議每個藥物濃度孔設置3個復制孔,最后取均值做曲線。

        6. 設計好實驗對照,盡量排除其它因素的干擾:1)空白對照:可以用加了等量細胞培養液、CCK-8溶液和藥物但沒有加細胞的孔;2)陰性對照:不加藥物但加了藥物溶劑的細胞孔。

        7. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應,如果待測物質有氧化性或還原性,可能會干擾檢測,需設法去除(加入CCK-8溶液之前更換新鮮培養基,去掉藥物影響。如果藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可)。

        8. 加入CCK-8溶液后注意孵育時間。對于大多數情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測,然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續實驗。

        9. 當在培養箱內培養時,培養板最外一圈的孔最容易干燥揮發,由于體積不準確而增加誤差。一般情況下,最外一圈的孔只加培養基,不作為測定孔用。

        10. 若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10ul 10% SDS溶液終止反應,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定,吸光度不會變化太大,一般還是建議立刻檢測。

        11. 用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡,否則會干擾測定。


        • CCK-8 Kit
        圖片展示
        • Certificate
        通過ISO 9001、ISO 13485質量體系認證
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