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      1. 一氧化氮測定試劑盒 (A013-2)

        使用說明書

        僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!

        第1版(2016年04月修訂)

        [預期應用]

        本試劑盒可測血清、血漿、組織樣本和其它生物液體中N0含量。

        一氧化氮NO (即血管內皮舒張因子),在生物體內作為種反應性極強的自由基,兼有第二信使和神經遞質作用,同時又是一種效應分子,在體內縣有廣泛的生理作用,如松弛血管平滑肌、抑制血小板聚集、調節腦血流、介導細胞毒效應和免疫調節、參與學習和記憶、動脈粥樣硬化等作用。NO產生異常與某些疾病的發生發展有著密切關系。因此,近年來對NO的研究越來越受到廣大科學工作者的重視。

         

        [試劑盒內容]


        試劑

        數量(96T)

        試劑數量(96T)

        Reagent 1

        1×20ml

        Reagent 5

        1×3ml

        Reagent 2

        1×10ml

        2mmol/L Sodium nitrite 標準品

        1×1ml

        Reagent 3

        1×10ml

        說明書

        1

        Reagent 4

        1×3ml



        測定前,雙蒸餾水2mmol/L標準溶液稀釋至20μmol/L。 


        [試劑盒的儲存及有效期]

        1. Reagent 14oC可保存6個月。              

        1. Reagent 24oC可保存6個月。              

        2. Reagent 34oC避光可保存6個月。             

        3. Reagent 44oC避光可保存6個月。            

        4. Reagent 54oC保存6個月。              

        5. 2mmol/LSodium nitrite標準4oC保存6個月。


        [試劑準備]

        1. 顯影劑:R3:R4:R5= 2.5:1:1,臨用前制備,在4oC存儲,當顏色加深時不能使用。

        2. 標準:用蒸餾水稀釋2 mmol/L亞硝酸鈉標準,分別為1:39、1:79、1:99、1:159、1:319、1:639,制備0.05mmol/L、0.025mmol/L、0.02mmol/L、0.0125mmol/L、0.00 625mmol/L、0.00 3125mmol/L標準溶液。

         

        [標本處理]

        1. 血清

        取血清直接用于實驗。

        2. 組織樣本

        動物組織:取適量組織樣本,稱重,按比例加入生理鹽水制備組織勻漿(質量體積比=1:9,例如900μl生理鹽水中加入100μg組織),2500~3000 0rp/min離心10分鐘,取上清液用于實驗。

        植物組織:取適量組織樣本,稱重,按比例加入 0.1mol/L PBS(pH7~7.4)制備組織勻漿(質量體積比=1:9,例如900μl0.1mol/L PBS( pH7~7.4)中加入100μg組織),4000rpm/min離心10分鐘,取上清液用于實驗。

        細胞樣本:用六孔板培養細胞,若要測定細胞培養上清中的總蛋白含量,則應直接檢測;若要確定細胞的總蛋白含量,則用胰蛋白酶消化細胞(或直接刮取細胞),收集細胞和液體于試管內,1000~3000 rpm/min離心5分鐘,棄上清液。在沉淀中加入1ml生理鹽水,混勻(洗脫胰蛋白酶原和培養液),1000~3000 rpm/min 離心5分鐘,棄上清液并保存沉淀細胞,加入0.2~0.3mL生理鹽水制備勻漿液(有以下4種勻漿方法):a. 細胞裂解液;b. 超聲處理;c. 搖晃; d玻璃勻漿器,每次研磨5~10秒,研磨3~4次,每次間隔20秒,取勻漿用于實驗。

        注:取樣前搖勻。

         

        [操作步驟]

        1. 標準品預處理

        用蒸餾水稀釋2 mmol/L Sodium nitrite 標準,稀釋倍數分別為1:39、1:79、1:99、1:159、1:319、1:639,制備0.05mmol/L、0.025mmol/L、0.02mmol/L、0.0125mmol/L、0.00625mmol/L、0.003125mmol/L標準溶液。

         

        2. 樣本預處理

        血清(血漿):

        100μl 血清(血漿), 加200μl Reagent 1 , 混勻,加100μl Reagent 2,漩渦充分混勻后靜置10分鐘,3500~4000rpm/min離心15分鐘,取上清液160μl 用于實驗。

        組織勻漿:取300μl 10%勻漿上清液,加200μl Reagent 1 , 混勻,加100μl Reagent 2, 漩渦充分混勻后靜置10分鐘,3500~4000rpm/min離心15分鐘,取上清液160μl 用于實驗。

         

        3. 操作表


        空白管標準管樣本管
        雙蒸水 (ml)0.16

        2 mmol/L Sodium nitrite 標準品(ml)
        0.16
        上清液(ml)

        0.16
        顯影劑(ml)0.080.080.08
        混勻,靜置15min,在550nm波長測量各孔O.D.值。


        [實驗原理]

        NO本身半衰期極短,血液中的NO主要由血管內皮細胞、血管平滑肌細胞、血小板、巨噬細胞等產生以亞硝酸鹽及硝酸鹽的形式存在,通過其濃度可以間接測定NO濃度。

         

        [說明]

        1. 嚴格按照說明書進行操作。

        2. 清液需澄清,若混濁,建議再次離心。

        3. 血清樣本出現溶血和渾濁會影響結果。

        4. 血液和組織在4~5℃保存3天,溫度越低,保存時間越長。在-20℃下可保存1~2個月。

        5. 請參考血清(血漿)檢測培養液并計算。

        6. 細胞培養上清樣本測算請參考血清血漿樣本。

         

        [下載]

        MSDA

        • Nitric Oxide Assay Kit (A013-2)
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        通過ISO 9001、ISO 13485質量體系認證
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