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      1. 總抗氧化能力檢測試劑盒(A015-1)

        使用說明書

        僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!

        第1版(2016年04月修訂)

        [預期應用]

        本試劑可測血清、血漿、組織,植物提取液等樣本中總抗氧化能力(T-AOC)。

        機體防御體系的抗氧化能力的強弱與健康程度存在著密切聯系。該防御體系包括酶促體系與非酶促體系。許多是以微量元素為話性中心,例如:超氧化物歧化(SOD)、谷胱甘過氧化物(GSH-PX)、過氧化氫酶(CAT). 谷胱甘肽-S-轉移商(GST)等,非酶促反應體系中主要為維生素、氨基和金屬蛋白質。例如,VE、胡蘿卜素、VC、半胱氨酸、蛋氨服、色氨被、組氨酸、葡萄糖、蘭蛋白、轉鐵蛋白、乳鐵蛋白等。這個體系的防護氧化作用主要通過三條途徑。(1)消除自由基和活性氧以免引發質過氧化: (2)分解過氧化物,阻斷過氧化鏈。(3)除去起催化作用的金屬離子。防御體系各成份之間相互起到了協同作用,以及代償作用與依賴作用。

         

        [試劑盒內容]

        試劑

        數量(96T/48T)

        試劑

        數量(96T/48T)

        Reagent 1

        2×60ml/1×60ml

        Reagent 4

        1×24ml/1×12ml

        Reagent 2

        2/1

        Reagent 5

        1×24ml/1×12ml

        Reagent 3

        1×5ml/1×3ml

        說明書

        1

        Reagent 3稀釋液

        1×60ml/1×30ml




        [需自備的設備及試劑]

        1、分光光度計(比色測定波長為520nm)              

        2、恒溫水浴箱或恒溫箱(孵育溫度:37℃和90~100℃)              

        3、臺式離心機              

        4、微量移液器及吸頭            

        5、漩渦混合儀        

        6、蒸餾水或去離子水

         

        [試劑盒的儲存及有效期]

        試劑盒2-8可保存6個月

        1. Reagent 1:無色液體,  2-8保存。              

        2. Reagent 2:白色晶體,  2-8避光保存。              

        3. Reagent 3:黃色溶, -20避光可保存1年。     

        4. Reagent 3稀釋液:2-8保存。        

        5. Reagent 4:無色粘稠液體,室溫保存。            

        6. Reagent 5:無色液體,  室溫保存。      

                

        [試劑準備]

        1. Reagent 2配制:使用時,加入120ml雙蒸餾水溶解(粉末難溶,可置于37℃加快溶解速度)。

        2. Reagent 3工作液制備:用R3稀釋液按1:19的比例稀釋R3。建議在使用前按所需量配制。

         

        [標本處理]

        1. 組織樣本              

        預處理:準確稱量樣品,按比例加入生理鹽水,如1g樣品加入9g生理鹽水。在冰上勻漿,于4oC,12000 rpm/min 離心5min ,取上清液用于實驗。   

        注意:對于組織樣本和細胞,需檢測總蛋白濃度。建議使用IS003 BCA蛋白定量檢測試劑盒測定蛋白質濃度。

               

        2. 全血    

        收集抗凝全血肝素為抗凝劑,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接定量吸取全血,用冷雙蒸水按1:9比例制備溶血液,如取0.02ml全血,加入0.18ml雙蒸水,混勻后制備1:9全血稀釋液;也可定量吸取全血,轉入EP管,低溫凍存(溫度越低越好),測定之前解凍并按比例加入冷雙蒸水制成1:9全血稀釋液用于檢測。         

        注意:不推薦使用EDTA作為抗凝劑。

         

        [操作步驟]

        1. 血清/血漿 T-AOC 實驗

        操作表:



        樣本管 (U) (ml)

        對照管 (C) (ml) 

        Reagent 1

        11

        血清/血漿

        a*


        Reagent 2

        22
        Reagent 3工作液0.50.5
        漩渦混合儀混勻,37℃水浴30分鐘。

        Reagent 4

        0.10.1

        血清/血漿


        a*

        靜置10分鐘, 移液至比色皿(1cm light path), 在520nm波長測量各孔O.D.值(用蒸餾水調零)。 

        * 推薦樣本量:血清/血漿, a*=0.1ml.

         

        2. 組織T-AOC實驗

        操作表:



        樣本管 (U) (ml)

        對照管 (C) (ml) 

        Reagent 1

        11

        10%組織勻漿

        a*


        Reagent 2

        22
        Reagent 3工作液0.50.5
        漩渦混合儀混勻,37℃水浴30分鐘。

        Reagent 4

        0.20.2
        10%組織勻漿

        a*

        Reagent 50.20.2
        靜置10分鐘, 移液至比色皿(1cm light path), 在520nm波長測量各孔O.D.值(用蒸餾水調零)。 

        * 推薦樣本量:10%組織勻漿, a*= 0.1~0.2ml.


         

        3. 全血T-AOC實驗

        操作表:


        樣本管 (U) (ml)

        對照管 (C) (ml) 

        Reagent 1

        11


        1:9全血稀釋液 

        a*


        Reagent 2

        22
        Reagent 3工作液0.50.5
        漩渦混合儀混勻,37℃水浴30分鐘

        Reagent 4

        0.10.1

        1:9全血稀釋液 


        a*

        靜置10分鐘, 移液至比色皿(1cm light path), 在520nm波長測量各孔O.D.值(用蒸餾水調零)。 

        * 推薦樣本量:1:9全血稀釋液, a*=0.05ml.

         

        [實驗原理]

        生物體內含有多種抗氧化化合物,能Fe3+還原成Fe2+,Fe2+與菲羅啉反應生成穩定的絡合物。它可以通過測量OD值來計算T-AOC。

         

        [說明]

        1. 樣本不立即用于實驗(如血清、血漿、組織等),可置于-80℃或低于-20℃保存。保存溫度越低樣本保存時間越長。

        2. 垂直樣品和試劑,不試管表面。

        3. 加入Reagent 1后加入樣品,充分混合。

        4. 如果檢測如鼓膜組織、牙髓等微型樣本,請用煮沸肥皂液徹底清潔試管。

        5. 請選用潔凈的試管, 用于檢測T-AOC、總氨基酸、VC、Ve的試管不建議用于測定SOD、GSH-PX、ATPase等,以免試管的殘留物影響酶活性。

        6. 用于T-AOC、總氨基酸、VC、Ve的試管洗滌時,先用煮沸的熱洗滌劑溶液洗滌再,用自來水沖洗10次以上,然后用蒸餾水漂洗一次,烘干或晾干, 以避免其他酶影響測量結果。

        7. 實驗中,在37℃水浴30分鐘后試管中出現一些沉積物,這些沉積物在加入Reagent 4消失,不會影響結果。

        8. 為了使液體混合均勻,推薦使用渦流混合。

        9. Reagent 4不易吸取,移液時,請緩慢取和加入。

        10. 該試劑盒僅供體外科研和實驗室使用。

         

        [下載]

        MSDA


        • Total Anti-Oxidative Capability Assay Kit (A015-1)
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